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2D-DIGE

更新时间:2020-04-23

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简要描述:

DIGE — 双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术

2D-DIGE

      DIGE — 双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术,其分离蛋白质混合的原理与双向电泳是一致的,主要利用蛋白质的等电点和分子量的差异来分离蛋白质混合物,同时应用荧光染料的灵敏度及内标的使用等技术,使其在定量蛋白质组学的研究中效果明显优于传统双向电泳。
      DIGE使用的荧光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它们能与蛋白质的赖氨酸侧链氨基反应而使蛋白质被标记,被标记蛋白质的等电点和分子量不受影响,等量混合标记好的蛋白质后进行双向电泳,不同凝胶之间可以通过cy2内标匹配,消除凝胶之间的差异,蛋白质表达量的变化则通过cy3和cy5不同荧光的强度来体现。
 
二、与常规双向电泳后,银染或考染胶相比,DIGE具有以下优势: 
     1、灵敏度高,低可检测到125pg的蛋白质;
     2、高效性,同一块凝胶上可以电泳两个样品,减轻了工作量;
     3、线性范围更广,动态范围高达10-5;
     4、定量, 采用内标消除了凝胶与凝胶之间的实验误差,显著提高了实验的度和可重复性;
     5、统计学分析,ImageMaster7.0(DIGE)软件可以得到统计学可信的结果,降低了操作者之间的偏差。

 

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