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TMT

更新时间:2020-04-23

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简要描述:

iTRAQ和TMT的技术原理一样,所不同的是二者的分子结构有差异。与SILAC相比(标记蛋白质),iTRAQ和
TMT是对肽段进行标记的。依据iTRAQ/TMT标签的质量数差异,通过MS实现对多组样品中的蛋白质进行相对定量:

简单介绍:iTRAQ和TMT的技术原理一样,所不同的是二者的分子结构有差异。与SILAC相比(标记蛋白质),iTRAQ和
TMT是对肽段进行标记的。依据iTRAQ/TMT标签的质量数差异,通过MS实现对多组样品中的蛋白质进行相对定量:
SILAC是通过上等MS( MSl)对蛋白质进行定量,而iTRAQ/TMT是通过二级MS( MS/MS.MS2)进行定量的j
iTRAQ/TMT能兼容所有来源的蛋白质样品,并且能同时分析多达8-10组的样品,分析通量高。

实验步骤:

1、分别提取蛋白质并定量;
2、Trypsin分别对蛋白进行酶解,提取肽段;
3、用不同质量数的iTRAQ/TMT标签分别对肽段样品进行标记:
4、标记完成后,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分);
5、对每个组分进行LC-MS分析:
6、蛋白质鉴定与定量分析,筛选差异表达的蛋白;
7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等):

技术优势
1、高通量,能同时进行多达8-10组样品蛋白质组的定性与定量分析; 
2、兼容所有来源的样品(动植物组织、**、血液等); 
3、实验周期短。  

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