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ROS活性氧检测实验

简要描述:

根据活细胞中红色荧光的产生,可以判断细胞R0S含量的多少和变化。二氢乙啶在细胞内主要被超氧阴离子型ROS氧化,用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。

更新时间:2021-04-07

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活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和周亡以及许多生理和病理过程。DHE活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DHE(Dihydroethidium)进行活性氧检测的,DHE可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的ROS氧化,形成氧化乙啶;氧化乙啶可掺入染色体DNA中,产生红色荧光。

在激发波长535nm,发射波长610 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内活性氧水平。

DHE探针标记:

1、DHE溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度,100-1000倍稀释, 以此染色液更换细胞培养液或灌流液;也可直接向细胞孵育液体或灌流液中加入DHE探针溶液至所需浓度。

2、依据细胞ROS含里的不同,DHE终浓度可选择在100-1000倍稀释的范围,孵育

时间可选择10-90分钟,在37C或室温进行避光孵育。

3、孵育结束后用新鲜溶液清洗细胞或组织.

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