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SILAC

更新时间:2020-04-23

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简要描述:

细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC),利用含轻、中或重型同位素标记的必需氨基酸(主要是Lys和Arg)培养基培养细胞,来标记细胞内新合成的蛋白质,一般培养5-6代,细胞中的蛋白质将都被同位素标记。

背景简介:SILAC( Stable Isotope  Labeling with   Amino acids in  Cell culture)技术是依据细胞生长对必需氨基酸的依赖原理,利用稳定同位素标记( 13C,15N,2H)的必需氨基酸对细胞蛋白质组进行代谢标记的方法;13C,15N,2H是稳定同位素,没有放射性,因此可以在常规条件下进行试验。

Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。将(13C,15N,2H)等稳定同位素标记的R、K、L加入细胞培养基中,在细胞进行蛋白质合成时,这些稳定同位素标记的氨基酸自然被“掺入”到蛋白质中。通过>6代的细胞增殖,整个细胞的蛋白质组会被稳定同位素氨基酸”标记”;

SILAC“标记”了蛋白质与“未标记”的蛋白质(普通培养基培养)存在数目的质量差异,该质量差异在后续LC-MS的上等质谱( MSl)中呈现一对同位素质谱峰,通过质谱峰的信号强度能实现对2组样品中每一个蛋白质表达水平的相对定量,终能确定蛋白质表达水平差异(差异蛋白质组学分析)和区分特异性和非特异性相互作用(蛋白质相互作用分析);同时通过二级质谱( MS/MS,MS2)实现对样品中蛋白质的鉴定。

SILAC技术结合LC-MS能同时实现对2组样品中蛋白质的定性和定量分析。实验技术“高、大、上“,通过定墨信息能直接反映出样品之间的蛋白质表达水平差异,便于快速找到感兴趣的目标分子。同时,利用SILAC技术,能明显提高文章的档次。

SILAC氨基酸对照表:

 

 

SILAC实验设计:

 

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