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2D-Gel

更新时间:2020-04-23

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简要描述:

2D-Gel技术是依据蛋白质等电点(iso-electric point)和分子量的差异,通过等电聚焦(IEF)和SDS-PAGE的二维分离,不同性质的蛋白质以点状的形式(spot)分布在凝胶上;

复杂蛋白质样品的高效分离是提高MS对蛋白质鉴定覆盖度的重要因素。2D-Gel技术是依据蛋白质等电点(iso-electric point)和分子量的差异,通过等电聚焦(IEF)和SDS-PAGE的二维分离,不同性质的蛋白质以点状的形式(spot)分布在凝胶上;

样品通过2D-Gel分离后,每个点上的蛋白质复杂度急剧降低。因此,凝胶上的蛋白质酶解后,不需要再进行LC分离,可以直接进行MALDI-TOF MS分析,从而缩短实验周期和降低MS测试费用;

2D-Gel技术的蛋白质样品(细胞、组织、体液等);

2D-Gel结合MALDI-TOF MS,主要用于差异蛋白质组分析。

技术路线:

实验流程:

1.蛋白质提取及定量;

2.蛋白质分别进行2D-Gel电泳及染色;

3.扫描图片,用软件对图像进行分析,寻找差异点;

4.切割差异点,Trypsin酶解,提取肽段,MALDI-TOF MS完成蛋白质鉴定;

5.数据筛选,挑选蛋白质进行验证(Western blot等)。

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