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脑损伤动物模型构建实验

更新时间:2020-07-13

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简要描述:

脑损伤动物模型构建实验:健康雄性大鼠,体重为230~260g。采用改进的Feeney自由落体硬膜外撞击方法。

脑损伤动物模型构建实验方法:

(1)复制方法 健康雄性大鼠,体重为230~260g。对于脑损伤动物模型构建实验采用改进的Feeney自由落体硬膜外撞击方法。损伤装置由底板、固定支架、垂直导杆、下落击锤和聚乙烯撞击圆锥组成。撞击圆锥头端直径为4mm、高为2.5mm。经腹腔注射水合氯醛(按350~400mg/kg体重的剂量)麻醉。将其头部固定于立体定向仪上,剪去顶部毛发,手术区域皮肤消毒。沿中线左侧切开头皮,分离骨膜,用牙科钻于中线旁2mm、紧挨冠状缝后开一直径5mm的圆形窗,硬膜保持完整。用20g砝码于10cm和30cm高处通过一金属导杆坠落,撞击置于硬膜上的圆锥上致轻、中型损伤,另用40g砝码于25cm高处坠落致重型损伤。轻、中、重三型损伤的致伤冲击力分别为200g·cm、600g·cm和1000g·cm,用锌汀粉封闭骨窗,缝合头皮,置鼠笼喂养。

(2)检测指标1)脑含水量测定 动物断头处死后,30s内取出大脑,用滤纸吸尽脑表面血液后,锐性分离左侧顶叶皮质约100mg,用电子分析天平称湿重后,置于110℃恒温干燥箱内烤干(24h),称干重。用Elliot公式计算各部位脑含水量百分率:脑含水量(%)=[(湿重-干重)/湿重]×100%2)血脑屏障定量测定 动物于损伤前1h注射2%伊文斯蓝(3ml/kg体重)。在取脑组织前,为清除血液中染料,可用生理盐水经左心室灌注至右心室流出清亮液体为止。取损伤侧皮质分别称重,加入二倍体积的二甲基甲酰胺,50℃水浴中孵育72h,1500g离心,离心10min,取上清液。应用分光光度计在伊文斯蓝最大吸收光谱635mm处检测吸光度,从标准曲线上查得伊文斯蓝含量,结果以μg/g脑组织表示。

3)病理学观察 损伤后24h再次麻醉,经升主动脉快速灌注生理盐水150ml,继之快速灌注冰冷的4%多聚甲醛200ml,随后再用其300ml在2h内慢速灌注,取脑组织浸入4%多聚甲醛内4℃后固定48h,常规乙醇脱水,石蜡包埋,行5μm冠状切片,作HE染色及尼氏小体染色,光镜下观察。若采用透射电镜观察者,灌注液为4%多聚甲醛和2%戊二醛/0.1MPB(pH7.4),随后浸入2%戊二醛/0.1MPB(pH7.4)内,4℃固定过夜。常规脱水,环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸铅铀染色,透射电镜观察。

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