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慢病毒包装分子实验

更新时间:2020-07-15

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简要描述:

慢病毒包装分子实验
过表达慢病毒是逆转录病毒的一种。构建的siRNA/miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比

慢病毒包装分子实验特点:

1. 直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。

2. 可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

3. 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。

4. 无需转染试剂,操作简便。

5.可以根据客户需要制备多种标记。

 原理:

慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。

慢病毒包装分子实验流程:

1. 含有目的基因的慢病毒表达载体的构建和质粒纯化提取。

   注:客户也可以提供构建好的重组慢病毒表达载体。

2. 慢病毒表达载体与包装系统共转染病毒包装细胞。

3. 收集病毒液。

4. 纯化和浓缩病毒。

5. 分装、- 80 oC保存。

6. 滴度测定及无菌检测。

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