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流式双染法检测细胞凋亡实验

更新时间:2020-08-19

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简要描述:

流式双染法检测细胞凋亡实验是基尔顿生物的基础服务项目之一,由细胞平台和分子平台经验丰富的实验人员操作完成。

凋亡和坏死,是常见的细胞死亡的两种方式,它们有着截然不同的特征。凋亡是细胞程序性死亡的主要表现形式,是一个主动性的生理反应机制;坏死则是细胞对严重损伤的一种被动反应和变性过程。

Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白,参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。

Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-FITC可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及坏死细胞区分开来。

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