肿瘤组织免疫组化实验技术服务

实验步骤
1.石蜡切片免疫组化:

①67°C烘箱烘片2小时,常规脱蜡至水用pH 7.4的PBS)冲洗E次。每次3 min ;②将切片置于沸腾的柠檬酸盐缓)冲液中中档微波处理10 min，蒸馏水冲洗三E次。PBS冲洗 E次每次3 min;③)3%H202室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶的活性, PBS)冲洗三次,每次3 min ;④5~10%正常山羊血清(PBS稀释)封闭.室温孵育10 min ,吸去血清后滴加稀释至适当比例的一抗。37°C孵育1-2 h或者4°C孵育过夜;⑤PBS冲洗三次每次3 min滴加稀释至适当比例的带标记:二抗379C孵育10~30 min，PBS冲洗三次每次3 min ;⑥滴加适当比例稀释的辣根酶标记物工作液379C孵育10-30 min, PBS冲洗三E次。每次3 min;⑦显色剂显色自来水充分冲洗，复染细胞核酒精脱水二甲苯透明、中性树胶封固。

2冰冻切片免疫组化:
①新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片厚度为5~6 um;
②载玻片可不打底裱片后立刻用电吹风吹干;
③染色前需用冷*酮4°c固定10-20 min:
④PBS洗2次,每次5 min;.
⑤)39%H202灭活内源性过氧化物酶20 min，需遍光处理;
⑥后续血清封闭与抗体孵育步骤与石蜡切片相似后脱水透明封片进行观察。