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稳定细胞株筛选实验

简要描述:

稳定细胞株筛选实验
稳定细胞株筛选是指将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

更新时间:2021-03-18

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一、服务介绍

稳定细胞株筛选常用物理方法(电转)、化学方法(脂质体等)、生物方法(病毒)。

 

二、实验原理

外源基因在细胞中的表达可分为两大类,一类是瞬时表达,一类是稳定表达(又叫表达)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,虽然可以达到高水平的表达,但通常只持续几天。后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因。建立稳定细胞株,一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶细胞进行筛选。常用的抗性标记基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。

 

三、实验流程

1、载体构建(表达质粒载体、病毒载体);

2、转染/感染;

3、目的蛋白初步检测;

4、抗生素筛选;


5、目的蛋白再次检测(定性/半定量);

6、单克隆细胞株稳定性检测。

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