大鼠超敏C反应蛋白ELISA实验

大鼠超敏C反应蛋白ELISA实验客户需提供大鼠血清、血浆、组织及相关液体样本，或者由我司直接取材。

大鼠超敏C反应蛋白ELISA实验原理和操作步骤：

 应用双抗体夹心法测定标本中大鼠超敏 C 反应蛋白（hs-CRP)水平。用纯化的
大鼠超敏 C 反应蛋白（hs-CRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次
加入超敏 C 反应蛋白（hs-CRP)，再与 HRP 标记的 hs-CRP 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标
抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并
在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的超敏 C 反应蛋白（hs-CRP)呈正相
关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠超敏 C
反应蛋白（hs-CRP)浓度。

 
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在孔一、孔二中分别加标准品 100μl，然后在孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，浓度分别为 6μg/L，4μg/L ，2μg/L，1μg/L， 0.5μg/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。