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大鼠超敏C反应蛋白ELISA实验

简要描述:

大鼠超敏C反应蛋白ELISA实验是基尔顿生物的基础服务项目之一,由专业的实验人员操作完成。

更新时间:2021-03-23

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大鼠超敏C反应蛋白ELISA实验客户需提供大鼠血清、血浆、组织及相关液体样本,或者由我司直接取材。

大鼠超敏C反应蛋白ELISA实验原理和操作步骤:

 应用双抗体夹心法测定标本中大鼠超敏 C 反应蛋白(hs-CRP)水平。用纯化的
大鼠超敏 C 反应蛋白(hs-CRP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次
加入超敏 C 反应蛋白(hs-CRP),再与 HRP 标记的 hs-CRP 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标
抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并
在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的超敏 C 反应蛋白(hs-CRP)呈正相
关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠超敏 C
反应蛋白(hs-CRP)浓度。

 
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在孔一、孔二中分别加标准品 100μl,然后在中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉,再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl,浓度分别为 6μg/L,4μg/L ,2μg/L,1μg/L, 0.5μg/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。

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